PCR儀利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成?;旧纤抢肈NA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制,目前常用的技術(shù),可以將一段基因復(fù)制為原來的百億至千億倍。
PCR要素基本要具備:
要被復(fù)制的DNA模板Template、界定復(fù)制范圍兩端的引物Primers、DNA聚合酶Taq.Polymearse以及合成的原料(四種脫氧核苷酸)及水。
現(xiàn)在的PCR儀大都是用半導(dǎo)體制冷片來控制溫度的,其通電后一面熱另一面冷,反向電極則熱冷面反向。
半導(dǎo)體制冷片雖然是工業(yè)化生產(chǎn),都幾乎都是手工的生產(chǎn)的,因此每一片都有差別,大的生產(chǎn)商會根據(jù)用戶的需要進(jìn)行配對,如一臺PCR儀要三片就三片配成大致相同的阻值。阻值一般是廠家寫在每片制冷片上的(自己用萬用表是量不準(zhǔn)的,因為一通電其溫度就變化,阻值就會改變)。
因此半導(dǎo)體片的質(zhì)量會影響PCR儀的均勻性。一般大的廠家出廠時問題不大,但使用一段時間后,半導(dǎo)體片的性能會下降,但下降程度并不一致,則溫度差別就表現(xiàn)出來了。
主要問題還是維修,半導(dǎo)體片本身是不能維修的。一般PCR儀都是多片半導(dǎo)體,普通維修會只更換其中一片,這樣就會造成新的跑得快,舊的跑得慢,溫度差別就大了。如果每片半導(dǎo)體片下面都有各自的溫度傳感器,則可以補(bǔ)償一些。當(dāng)然更換半導(dǎo)體片后的裝配也是技術(shù)性很強(qiáng)的活,不經(jīng)過嚴(yán)格的培訓(xùn)是做不到的。這也是為什么大廠一般不在現(xiàn)場維修,而是要返廠,并且是一次性更換一套半導(dǎo)體片,因此成本較高。